Untuk dapat mengekstrak pigmen dari kloroplas digantung dalam penimbal pengasingan. Untuk dapat mengekstrak pigmen daripada kloroplas, kita perlu menyingkirkan penimbal terlebih dahulu. Apakah cara terbaik untuk mengasingkan kloroplas daripada penimbal? gunakan emparan untuk memisahkan
Bagaimanakah anda mengasingkan kloroplas?
Dalam kaedah pengasingan kloroplas, dinding sel dipecahkan secara mekanikal menggunakan pengisar atau penghomogen. Kemudian tisu daun yang tidak patah dan serpihan selular dikeluarkan melalui penapisan. Kloroplas dikumpulkan melalui sentrifugasi menggunakan kecerunan percoll.
Bagaimanakah anda membuat penimbal pengasingan kloroplas?
Sediakan jumlah 1X penimbal Pengasingan Kloroplas yang diperlukan dengan mencairkan stok penimbal 2X 1:1 dengan air dH2O Tambah 10 µL larutan BSA 10% setiap mL 1X Kloroplas Penampan Pengasingan. Sebelum digunakan, tambahkan 1 µL DTT setiap 1 mL Penampan Pengasingan Kloroplast. Labelkan penimbal ini sebagai 'Penimbal Lengkap'.
Apakah yang terdapat dalam penimbal pengasingan kloroplas?
Penimbal pengasingan DNA terdiri daripada 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM EDTA, dan 1 mM DTT Lise kloroplas diperoleh dengan mengeram pelet kloroplas dengan 8 ml penimbal pengasingan DNA, 1.5 ml 20% SDS, 20 µl 2-Mercaptoethanol dan 30 µl Proteinase K (10 mg/ml) ke dalam tiub emparan pada suhu 55°C selama 4 jam.
Apakah pH penimbal yang digunakan untuk menghomogenkan daun bayam dalam protokol pengasingan kloroplas?
Bayam sarat dengan kloroplas yang baik dan ia mudah diasingkan. Anda perlu memasukkan daun ke dalam pengisar sejuk dengan penimbal fosfat 0.1 M, pH 7.5 dan 0.5 M sukrosa untuk mengelakkannya daripada pecah.
