Berikut ialah gambaran keseluruhan langkah-langkah berbeza protokol pewarnaan imunofluoresensi tidak langsung
- Perancangan Eksperimen dan Penyediaan Sampel. …
- Sampel Penetapan. …
- Permeabilisasi Sel. …
- Menyekat. …
- Inkubasi Antibodi Utama. …
- Inkubasi Antibodi Sekunder. …
- Counterstain dan Mounting.
Bagaimanakah anda melakukan imunofluoresensi?
Semua langkah pengeraman berlaku pada suhu bilik
- Basuh sel dua kali dan gunakan pinset untuk meletakkan penutup dengan sel terbalik dengan berhati-hati ke dalam ruang yang dilembapkan.
- Betulkan dengan 4 % formaldehid selama 10 minit dan basuh 3 ×.
- Telapkan dengan 0.1 % TX-100/PBS selama 15–20 minit dan basuh 3 ×.
Bagaimanakah anda menggunakan imunofluoresensi dalam sel?
Protokol imunofluoresensi untuk sel melekat
- Biji 1–1.5 x104 sel setiap perigi slaid 4 ruang dalam 500 mL medium kultur. Inkubasi pada 37°C pada 5% CO2.
- 32–36 jam selepas pembenihan sel, keluarkan medium kultur sel dan bilas sel 3 kali menggunakan 500 µL 1X PBS.
Apakah contoh imunofluoresensi?
Sebagai contoh, penyelidik mungkin mencipta antibodi utama dalam kambing yang mengecam beberapa antigen, dan kemudian menggunakan antibodi sekunder arnab bergandingan pewarna yang mengenali kawasan pemalar antibodi kambing (" antibodi anti-kambing" arnab).
Apakah kegunaan pewarnaan imunofluoresensi?
Pewarnaan imunofluoresensi (IF) ialah teknik yang digunakan secara meluas dalam penyelidikan biologi dan diagnostik klinikal IF menggunakan antibodi berlabel pendarfluor untuk mengesan antigen sasaran tertentu. Diikuti dengan pengimejan, ia adalah teknik yang sangat langsung kerana anda sebenarnya boleh melihat sesuatu.